大分子相互作用儀(如表面等離子共振(SPR)儀器、等溫滴定量熱儀(ITC)、生物層析分析儀(BLI)等)是研究蛋白質(zhì)、核酸等大分子間相互作用的重要工具。為確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性,定期對(duì)儀器進(jìn)行校正是非常必要的。以下是一般步驟:
1. 準(zhǔn)備工作:在開(kāi)始校正之前,確保所有使用的試劑均為分析級(jí),且溶劑需脫氣以避免產(chǎn)生氣泡。另外,根據(jù)所使用儀器的說(shuō)明書(shū),將儀器預(yù)熱至推薦的操作溫度。
2. 系統(tǒng)校正:對(duì)于SPR儀器,通常需要進(jìn)行光學(xué)系統(tǒng)的校正,包括波長(zhǎng)校準(zhǔn)和角度校準(zhǔn)。這通常通過(guò)使用純凈的水或特定的校準(zhǔn)液來(lái)完成。確保傳感器芯片的正確安裝,并檢查流動(dòng)池是否干凈,無(wú)指紋或灰塵。
3. 基線穩(wěn)定性:運(yùn)行緩沖溶液,確保基線穩(wěn)定。任何溫度波動(dòng)或外部擾動(dòng)都可能影響基線的穩(wěn)定性,進(jìn)而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
4. 樣品制備:準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)樣品,這些樣品的濃度和性質(zhì)應(yīng)覆蓋待測(cè)試樣品的范圍。對(duì)于ITC,需要精確測(cè)量樣品的濃度,并保證參比池內(nèi)僅含有緩沖溶液。
5. 標(biāo)準(zhǔn)曲線:使用已知親和力或熱力學(xué)參數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)樣品來(lái)生成標(biāo)準(zhǔn)曲線。這一步驟有助于后續(xù)數(shù)據(jù)分析的準(zhǔn)確性。
6. 重復(fù)性檢驗(yàn):多次測(cè)量同一樣品以評(píng)估儀器的重復(fù)性。如果發(fā)現(xiàn)較大的偏差,則需要檢查儀器的設(shè)置或樣品的均一性。
7. 靈敏度檢驗(yàn):對(duì)于BLI類的儀器,可通過(guò)已知質(zhì)量的蛋白A/G固定到傳感器表面來(lái)檢驗(yàn)其靈敏度。然后,流過(guò)不同濃度的抗體,觀察響應(yīng)信號(hào)是否符合預(yù)期。
8. 樣品間干擾檢查:確保不同樣品間沒(méi)有交叉污染。在測(cè)量一系列樣品前后注入空白緩沖液,檢查是否有前一個(gè)樣品的殘留。
9. 數(shù)據(jù)處理軟件:確認(rèn)數(shù)據(jù)處理軟件正常工作,校正參數(shù)設(shè)置正確,能夠準(zhǔn)確處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
10. 記錄與維護(hù):詳細(xì)記錄校正過(guò)程中的所有步驟、使用的試劑及其批號(hào)、校正結(jié)果等。此外,定期對(duì)儀器進(jìn)行清潔和維護(hù),以保持其最佳性能。
大分子相互作用儀的校正是一個(gè)綜合性的過(guò)程,涉及儀器的物理狀態(tài)、化學(xué)試劑的質(zhì)量以及數(shù)據(jù)處理的準(zhǔn)確性。正確的校正可以顯著提高實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性,為研究提供堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。